ATP生物发光技术快速检测水中细菌的研究
目的：探索利用ATP生物发光技术测定水中细菌量的可行性。
方法：利用生物发光技术测定细菌中ATP量，根据细菌中ATP量与细菌数成正比这一原理，推算出水中菌落总数，于国标平皿计数法进行对比、分析两者之间的相关性。
结果：检测结果与传统国标法有很好的相关性。结论：利用生物发光技术测定细菌中ATP量，检测结果与传统国标法有很好的相关性，具有准确、便利、快捷等特点。
水中菌落总数的测定是水质监测的一项重要指标，它直接反映水的细菌污染程度。水质的好坏与人们的生活密切相关。目前的水菌落总数测定采用国标平皿计数法即37℃恒温培养48±2小时，这种方法耗时长且程序复杂，不利于水质的即时监测。因此，确定一套快速有效的菌落总数测定方法成为未来水质监测的发展方向。
ATP生物发光法是利用生物发光技术测定细菌中ATP量，利用细菌中ATP量与细菌数成正比这一原理，推算出菌落总数。这种方法不需要培养过程，操作简便，15至20分钟内即可完成，检测结果与传统国标法有很好的相关性。
1.材料与方法
1.1 仪器与试剂
ATP生物发光快速检测系统配套仪器及试剂；所有试剂均在有效期内使用。
发光反应试剂（LLR）、细菌细胞ATP释放试剂（XRA）、体细胞ATP释放试剂（TRA）。
1.2 样品来源
取自沈阳市市郊丁香湖水
1.3 样品制备
将水样用磷酸盐缓冲液稀释到实验所需浓度
1.4 国标法平皿计数
将水样稀释液培养（营养琼脂，37℃，48小时）并计数。
1.5 ATP检测方法
操作步骤如下：①抽取1ml用磷酸盐缓冲液稀释的水样，用专用浓缩器通过过滤比色杯浓缩，使水样中的细菌细胞、体细胞及其它杂质附集在过滤比色杯的滤膜上。②将过滤比色杯置于有专用吸水滤纸的比色杯架上，向比色杯中滴加4滴TRA，使体细胞中ATP释放出来，用专用加压器加压排除反应液。③重复②步骤，使样品中的外源ATP充分排除。④从比色杯架上取下过滤比色杯，将其放入微量光度计的抽屉中，再向过滤比色杯中加入2滴XRA，使细菌细胞ATP释放。⑤用移液枪抽取50μlLLR加入过滤比色杯中抽吸两次后，迅速将抽屉推入微量光度计中，测其发光值RLU。⑥每个稀释水样平行测定两次，取平均值。
2 实验结果
平皿计数结果与发光值RLU结果比较，见表1
稀释倍数
RLU(1ml浓缩)
平皿计数(cfu/ml)
1 2 平均值
lgRLU 1 2
平均值
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